NWSuper100&150ゲル濾過クロマトグラフィー媒体

製品紹介

 NWSuper100&150は、生体分子の分離・精製に使用されるアガロースゲルクロマトグラフィー媒体です。アガロースを原料とし、高度に架橋されたデキストランから作られた微粒子で、親水性と多孔性を持ち、タンパク質、多糖、核酸などの生体サンプルの高分解能分離と精製によく使用されます。特に、タンパク質の分離に最適なゲル濾過クロマトグラフィー媒体です。
NWSuper100&150ゲル濾過クロマトグラフィー媒体の特徴:
●均一なゲル粒子で、高い分解能を提供し、通常のカラム効率は12000以上。
●高速で分離を達成可能。
●高い化学的・物理的安定性で高収率を実現。
●簡単にスケールアップして生産可能。

図1. NWSuper100&150標準デキストラン分子量選択曲線

 NWSuper100&150の分離・精製の原理は分子篩原理(モレキュラーシーブまたはゲルろ過原理)であり、分子篩は最も簡単で穏やかなクロマトグラフィー技術です。この分子篩原理(ゲルろ過原理)は主に高分解能の分離精製に使用されます。
高分解能分離:生体分子の大きさの違いに基づいて分離を行います。高分解能分離は、サンプルを1つまたは複数の成分に分離することが可能で、例えば、凝集体からモノマーを分離したり、モノマー分子から凝集体を除去したり、分子量や分子量分布の分析に使用されます。注意:天然のタンパク質には立体構造があるため、場合によっては、タンパク質の分子量の大きさと天然構造の大きさが一致しないことがあります。すなわち、いくつかの高分子天然構造のタンパク質は、分子量がわずかに小さい線形分子よりも、ゲルろ過分離の挙動が小さくなる場合があります。
 NWSuper100は主に5k-100kDaのタンパク質の分離を目的として設計されており、NWSuper150は主に5k-250kDaのタンパク質の分離を目的としています。
 NWSuper100&150のゲルろ過クロマトグラフィー媒体の技術仕様は、表1に示されています。

表1. NWSuper100&150のゲルろ過クロマトグラフィー媒体の技術仕様

製品型式NWSuper100NWSuper150
分離原理分子篩分子篩
基材高架橋アガロースとデキストラン微粒子
平均粒径(水膨潤時)24-44µm
分離範囲(球状分子)5~100kDa5~250kDa
最大流速90cm/h
流速範囲30-60cm/h
耐圧0.3MPa(最大耐圧0.5MPa)
pH安定性3-12(使用時)、1-14(CIP時)
化学安定性一般的な水系溶液、1MNaOH、6M塩酸、30%イソプロパノール、70%エタノール
使用温度4~40°C
保存条件20%エタノール、4~30°C

NW Super 100&150の分離原理
 NWSuper 100&150は、分子篩(ゲルろ過)の原理を使用して分離および精製を行います。これは、生体分子がクロマトグラフィーカラム(充填済みのクロマトグラフィー媒体)を通過する際に、分子の大きさ(通常は分子量の大きさに基づく)に従って分離される方法です。
 生体分子はクロマトグラフィー媒体と結合せず、媒体の孔径を通過することで分離が行われます。そのため、緩衝液の成分は分離効率(分解能)に直接影響を与えることはありません。

 カラムベッド体積 はクロマトグラフィーカラムの物理的体積であり、カラムの底面積とカラムの高さを掛けたものです。

図3. ゲルろ過による分離の概略図

 NW Super 100&150はアガロース親水性微粒子であり、惰性材料で、通常は生体分子と反応しません。ゲルろ過は温和な分離/精製技術であり、温度、塩濃度、pH値などは分離効果に影響を与えません。クロマトグラフィーの過程で、サンプルは元の緩衝液から流動相へ徐々に移行します。サンプルの溶解緩衝液と流動相緩衝液は、できるだけ同じ成分を使用することが推奨されます。異なる成分を使用する場合は、サンプルの溶解度に注意する必要があります。

クロマトグラフィーの応用

高分解能分離:
a) NW Super™75シリーズのアガロースゲルクロマトグラフィー媒体は、一般的に3K-70KDのタンパク質の分離に使用されます。
b) 一般的に60cm以上の長いカラムを使用します。
c) サンプルのロード量はカラムベッド体積の1〜5%です。
d) 流速は分解能に大きな影響を与えるため、通常は低速を採用します。
e) 150mMのNaClを加えることで、非特異的な吸着を減少させることができます。

図4.  NW Super 150(16/70カラム、120ml)のクロマトグラフィー図

図6.  NW Super 100(10/30カラム、24ml)のクロマトグラフィー図

NW Super 100&150ゲル濾過クロマトグラフィー媒体製品仕様書

品名包装品番
Nw Super 100150 mL60013-030000-2150
500 mL60013-030000-2500
1 L60013-030000-1001
5 L60013-030000-1005
10 L60013-030000-1010
Nw Super 150150 mL60013-030100-2150
500 mL60013-030100-2500
1 L60013-030100-1001
5 L60013-030100-1005
10 L60013-030100-1010

注記: 7.7 mm × 22 mm、16 mm × 25 mm、7.7 mm × 100 mmのクロマトグラフィー用プレパックカラムを提供可能です。その他の仕様やカスタム要件については、お問い合わせください。

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