製品紹介
NW Rose FFシリーズアガロースゲルは、生物分子の分離および精製に使用されるクロマトグラフィー媒体です。アガロースを原料とし、乳化、架橋、サイズ分別を経て製造されたアガロース微粒子で、親水性と多孔性を持ち、ウイルス、タンパク質、多糖、核酸などの高分子生物サンプルの分離・精製または検出に広く使用されます。この媒体は高い物理的および化学的安定性を持ち、流速が速く、大規模な分離・精製に適しています。
NW Rose FFシリーズの分離・精製原理は、分子ふるい（またはゲル濾過）原理に基づいています。分子ふるい法は、最もシンプルで温和なクロマトグラフィー技術であり、主に以下の分野で使用されます。生体高分子の分離・精製：例としてウイルスなどの分子から不純物を除去するプロセスや、バッファーの交換が挙げられます。
NW Rose 6FFアガロースゲル媒体の特性は次の通りです。
- 高い化学的および物理的安定性、pH2～12の範囲で使用可能
- 流速が速い
- 大規模生産に適している
- 清浄が容易
図1. NW Rose 4/6FFの選択性曲線（青はNW Rose 4FF、茶はNW Rose 6FF）
表１. NW Rose 4FF、NW Rose 6FFの技術仕様
| 項目 | NW Rose 4 FF | NW Rose 6 FF |
| アガロース濃度 | 4% | 6% |
| 除外限界 | 線形分子≒6000 kDa | 線形分子≒2000 kDa |
| 球状分子≒30,000 kDa | 球状分子≒4000 kDa | |
| 粒子サイズ範囲* | 45-165 µm | 45-165 µm |
| 平均粒子サイズ** | 90 µm | 90 µm |
| 使用流速 | 90cm/h(カラム:50/100,高さ:80cm) | 110cm/h(カラム:50/100,高さ:80cm) |
| 最大使用流速 | 150cm/h(カラム:50/100,高さ:80cm) | 200cm/h(カラム:50/100,高さ:80cm) |
| 最大耐圧 | 0.3 MPa (3 bar) | 0.3 MPa (3 bar) |
| pH安定性 | pH 2-12（作業範囲）、 pH 2-14（CIP、短期間） | pH 2-12（作業範囲）、 pH 2-14（CIP、短期間） |
| 化学的安定性 | 2M NaOH、8M尿素、6M塩酸グアニジン、70%エタノール、 30%イソプロパノール、1% SDS | |
| 滅菌 | 0.5M NaOH で2時間、または 121℃で20分間水溶液 | |
| 保存条件 | 20%エタノール、室温 | |
| 外観 | 白色の球状粒子、放置すると層が分かれる | |
| 注意事項 | 凍結により媒質の内部構造が破壊される可能性があります | |
** 溶液により粒子サイズが異なる場合があります。このデータは、水溶液中での粒子サイズを示しています。
NW Rose 4FF/NW Rose 6FFの分離原理
NW Rose 4FF/NW Rose 6FFの純化および分離は、ゲルろ過（分子篩）原理に基づいています。ゲルろ過では、生体分子が充填されたクロマトグラフィーカラムを通過する際、分子のサイズ（通常は分子量に基づいて）によって分離されます。生体分子はクロマトグラフィー媒体と結合することなく、媒体の孔径を通過しながら分離されるため、緩衝液の成分は分離結果（分解能）に直接影響を与えることはありません。
図3. クロマトグラフィーの概略図
図4. ゲルろ過による分離の概略図
NW Rose 4FF/NW Rose 6FFアガロース親水性微粒子は、惰性材料であり、生体分子と反応しません。ゲルろ過（サイズ排除クロマトグラフィー）は、温和な分離・精製技術であり、温度、塩濃度、pH値などが分離効果に影響しません。クロマトグラフィー過程では、サンプルは緩衝液に溶解され、同じ（または異なる）緩衝液を移動相として使用します。
カラム推奨：
NW Rose 4FF/NW Rose 6FFは、ゲルろ過（サイズ排除クロマトグラフィー）の媒体であり、使用するクロマトグラフィーカラムは、分離・精製の規模に応じて選択されます。
実験室規模
実験室規模での精製の場合、処理するサンプル量に応じて決定します。ゲルろ過（サイズ排除クロマトグラフィー）のカラムにサンプルをロードする量は、一般的にカラムベッド体積の1～5%です。サンプルの量が少ない（1%程度）ほど分離効果が良く、サンプル量が多い（5%以上）ほど分離効果は低下します。カラムの選択には、一般的に60～100cmのカラムベッドの高さを推奨します。
生産規模
生産規模に使用するクロマトグラフィーカラムも、サンプル量に基づいて選択されます。カラムの高さは、実験室スケールと同じに設定されます。カラムの直径が300mm未満の場合、通常は1本のカラムで分離します。直径が300mmを超える場合、2本以上のカラムを直列に接続して使用します。
NW Rose 4FF/NW Rose 6FF推奨緩衝液
分離・精製の過程で使用する緩衝液は、以下の原則に基づいて選択されます:生体分子が安定する緩衝液のpHや塩濃度不安定な緩衝液を使用すると、分離・精製中にサンプルが凝集・沈殿し、カラム圧力やサンプルの回収率に悪影響を与える可能性があります。非特異的吸着を減らすための塩の添加一般的に、緩衝液には0.15Mの塩（例: NaCl）を加えます。これにより、非特異的な吸着が減少し、収率が向上します。有機試薬の使用有機試薬を追加することができますが、高濃度の有機試薬はクロマトグラフィー媒体が収縮する可能性があるため、追加前に媒体の耐性を確認する必要があります。粘度の影響有機試薬（例: グリセロール）を使用する場合、粘度が高くなると分離・精製に影響を与えるため、注意が必要です。サンプルの緩衝液も同様に分離・精製の効果に影響します。
クロマトグラフィーの応用
緩衝液の交換：NW Rose 4FF/NW Rose 6FFアガロースゲルクロマトグラフィー媒体は、水相緩衝液が選択され、害のある試薬の除去や緩衝液の交換に使用されます。
●分子量の違いによる分離：異なる分子量の生体分子を分離するには、分子量の差が1倍以上必要です。分子量の差が小さいと、分離効果が不十分になる可能性があります。
●大分子ウイルス（例：ワクチン製品）の分離：
サンプルのロード量は、カラムベッド体積の5〜20%で、塩濃度の要件に基づいて決定します。ロード量が少ない場合、分離度が良好であれば、ロード量を増やすことができます。 B. 流速は通常30〜60cm/hで、適切な圧力（1バール以下）を維持します。
大分子ウイルス（例:：ワクチン製品）の分離：
A. サンプルのロード量は、カラムベッド体積の5〜20%で、塩濃度の要件に基づいて決定します。ロード量が少ない場合、分離度が良好であれば、ロード量を増やすことができます。
B. 流速は通常30〜60cm/hで、適切な圧力（1バール以下）を維持します。
図5. 狂犬病ワクチンウイルスの精製クロマトグラフィー図
NW Rose 4FF/NW Rose 6FFゲル濾過クロマトグラフィー媒体製品仕様書
| 品名 | 包装 | 品番 |
| NW Rose 4 FF | 200 mL | 60012-014900-2200 |
| 1 L | 60012-014900-1001 | |
| 10 L | 60012-014900-1010 | |
| NW Rose 6 FF | 200 mL | 60012-015900-2200 |
| 1 L | 60012-015900-1001 | |
| 10 L | 60012-015900-1010 |
