クロマトグラフィー媒体製品の紹介

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一、クロマトグラフィー媒体製品の概要

1、クロマトグラフィーはバイオ製薬工程における位置

  焦点を当ててみるとクロマトグラフィーはバイオ製薬の工程の位置が次のように示されています。

2、クロマトグラフィー媒体製品シリーズ

ポリマー媒体ポリマー媒体シリカ媒体ポリマー媒体シリカ媒体
親和(AC )
•Protein A
•IMAC
•GST 親和
•ホウ酸 親和
•Heparin 親和
•mRNA 親和
•Plasmid 親和
•ET removal 親和
•AAV (under development)
イオン交換(IEC )
•NanoGel シリーズ
•UniGel シリーズ
•Nano シリーズ
•NW Rose FF シリーズ
•NW Rose BBシリーズ
•NW Rose Plus シリーズ
正相(Normal phase)
•UniSil
•UniSil HP
•UniSil CN
•UniSil NH2
•UniSil Diol
•NMSil
イオン交換(IEC)
•UniCM-30S
•UniSP-30S
•UniDEAE-30S
•UniQ-30S
•UniCM-50XS
•UniSP-50XS
•UniDEAE-50XS
•UniQ-50XS
•UniMSP-30XS
•UniMSP-50XS
逆相(Reversed phase)
•UniSil C18
•UniSil C8
•UniSil C4
•UniSil C18 AQ
•UniSil C18 Polar
•UniSil Ph
•UniSil PFP
•UniSil PBB
•UniHybrid C18
•UniHybrid C8
•UniHybrid C4
•UniSil Revo シリーズ
疏水(HIC)
•UniHR シリーズ
•NanoHR シリーズ
•NW Rose Phenyl FF シリーズ
•NW Rose Plus シリーズ
マルチ式(Multimode)
•NM90Agarose シリーズ
•NW Rose Viral シリーズ
•NW Rose Plus シリーズ
•NMCHT シリーズ
親水(HILIC)
•UniSil HILIC
•UniSil HILIC-2M
•UniSil HILIC-T
•UniSil Amide
•UniSil
•UniSil Diol
•UniSil NH2
逆相(Reversed phase)
•UniPS
•Uni PSN
•Uni PSA
•Uni PMM
•NM
サイズ排除(SEC)
•NW Dex-25 シリーズ
•NW Super シリーズ
•NW Rose 4FF/6FF
イオン交換(IEC)
•UniCM-30S
•UniSP-30S
•UniDEAE-30S
•UniQ-30S
•UniCM-50XS
•UniSP-50XS
•UniDEAE-50XS
•UniQ-50XS
•UniMSP-30XS
•UniMSP-50XS

3、クロマトグラフィーの原理


二、各クロマトグラフィー媒体の案内

1、親和性クロマトグラフィー媒体

プロテインA 親和性 クロマトグラフィー媒体

組換え黄色ブドウ球菌プロテインA
自由実施権を有する独立した知的財産FTO(Free to Operate)
アルカリ耐性rPAリガンドの知的財産

表. プロテインA樹脂の特性

製品名称基材粒子サイズDBC (IgG)
NMab Titan高度に架橋された アガロースビーズ~75 μm~ 70 mg/ml (RT 6min)
NMab Pro高度に架橋された アガロースビーズ~69 μm≥65 mg/ml (RT 6min)
NMab高度に架橋された アガロースビーズ~90 μm≥55 mg/ml (RT 6min)
UniMab 50HCPMMA~50 μm~ 50 mg/ml (RT 6min)
UniMab 50PMMA~50 μm~ 40 mg/ml (RT 6min)

抗体精製の推奨


2、イオン交換クロマトグラフィー媒体(IEC)

適合対象:大きな孔径、高分子量タンパク質に適合
製品: NanoGel-50Q, NanoGel-50SP HP
応用分野:抗体、ワクチン(組換えタンパク質)

適合対象:アガロース基材、あらゆる種類の分子に対応可能
製品:NW Rose FF シリーズ, NW Rose Plus シリーズ, NW Rose big beads シリーズ
応用分野:抗体、組換えタンパク質、ペプチド/オリゴヌクレオチド、ワクチンなど

適合対象:多数の製品で複数の応用分野に対応可能
製品:UniGel-80SP, UniGel-80Q, UniGel-30SP, UniGel-30Q
応用分野:ワクチン(組換えタンパク質)、抗体

イオン交換媒体機能基及び略語

タイプ機能基略語特性pKa
強カチオン交換-(CH2)3SO3 スルホン酸基SP強酸性, 移動相pH 1-14<2
弱カチオン交換-CH2COO カルボキシレートCM弱酸性, 移動相pH > 44-6
強アニオン交換-CH2N+(CH3)3 第四級アンモニウムQ強アルカリ性, 移動相pH 1-14>12
弱アニオン交換-(CH2)2N+ (CH3)2 第三級アミノ基DEAE弱アルカリ性, 移動相pH <9>9

●移動相のpHは等電点(pI)とpKaの間であるべき
●移動相のpHは、分析物のpIから少なくとも1.0 pH単位離れているべき
●pH<3.0の場合は強カチオン性媒体、pH>10.0の場合は強アニオン性媒体を選択

標的分子の等電点(PI)に応じて、適切なIEX媒体を選択する。

2-1NanoGel シリーズ イオン交換媒体

応用分野:抗体、ワクチン(組換えタンパク質)

製品技術仕様

製品名NanoGel-50SP HPNanoGel-50SPNanoGel-50Q HCNanoGel-50Q
基材PS/DVB
動的結合容量~70 mg·mL-1(hIgG)~100 mg·mL-1(Lys)~120 mg·mL-1(BSA)~80 mg·mL-1(BSA)
最大圧力2.0MPa
CIP1M NaOH

●大きな孔径、高分子量タンパク質の精製に適している。
●高い導電率における高い動的結合容量が生産性を向上させる。
●低逆圧での高流速がプロセス時間を短縮する。

高い導電率でも動的結合容量が高い

 Capto S ImpActのDBCは、導電率が4mS/cmの時と比較して10mS/cmの時に70%減少しますが、NanoGel-50SP HPの場合は14%の減少にとどまります。これにより、NanoGel-50SP HPが高い塩耐性を持つことが示されています。
(※塩の濃度が上がると導電率が上がる).

2-2UniGelシリーズイオン交換媒体の特性

適用分野:ワクチン(組換えタンパク質)、抗体。

製品技術仕様

媒体タイプUniGel-SPUniGel-QUniGel-CMUniGel-DEAE
支持基材:単分散で高架橋のポリメタクリレートビーズ
粒子サイズ(μm)30, 65, 8030, 65, 8030, 8030, 80
イオン交換タイプ強カチオン強アニオン弱カチオン弱オニオン
交換基-(CH2)3SO3-CH2N+(CH3)3-CH2COO-(CH2)2N(CH3)2
動的結合容量(mg/mL)~115 (Lys) / ~115 (IgG) / ~115 (Lys)~80 / ~140 /~80 (BSA)~105 (Lys)~ 80 (BSA)
作業圧力粒子径 30 μm は<1 MPa ;粒子径65 μm, 80 μmは<0.5 MPa
pH安定性2-12 (稼働時), 1-14 (CIP)
作業温度4-30℃

●良好な親水性があり、非特異的吸着が低い。
●分子量が100 kDa未満のタンパク質の精製に適しています。

2-3NW シリーズ イオン交換 媒体

品番呼称法:

NW シリーズ イオン交換媒体の特性

品名NW Rose  FF
シリーズ
NW Rose BB
シリーズ
NW Rose Plus
シリーズ
NW Rose Plus HP
シリーズ
支持基材架橋されたアガロースビーズ高度に架橋されたアガロースビーズ
粒子サイズ(μm)45-165100-300~90~50
リガンドSP / Q / CM/ DEAESP / Q / CM/ DEAEフェニル(高置換)フェニル
推奨流速60-300 cm/h2000-600 cm/h300-500  cm/h150-300  cm/h
作業圧力<0.3 MPa<0.3 MPa<0.5 MPa<0.5 MPa
化学安定性一般的なクロマトグラフィー溶液で使用可能です。詳細については、製品マニュアルをご参照ください。
保存20%エタノール, 4-30℃

3、疎水性 媒体(HIC)

3-1UniHR と NanoHR シリーズ 疎水性 媒体

応用分野:ワクチン(組換えタンパク質)、抗体

製品技術仕様

品名UniHR
Butyl-30L
UniHR
Phenyl-30L
UniHR
Butyl-80L
UniHR
Phenyl-80L
NanoHR
Butyl-15L
NanoHR
Phenyl-15L
基材PMMAPS/DVB
DBC~15 mg·mL-1 (Lys)~15 mg·mL-1 (Lys)~10 mg·mL-1 (Lys)~10 mg·mL-1 (Lys)~25 mg·mL-1 (Lys)~30 mg·mL-1 (Lys)
最大圧1.0 MPa1.0 MPa0.5 MPa0.5 MPa4.0 MPa4.0 MPa
CIP1 M NaOH / 70% エタノール

3-2NW Rose シリーズ 疎水性 媒体ラインナップ(他社と比較しながら)

※上部はNW Roseシリーズで、下部は各他社の製品

NW Rose シリーズ 疎水性 媒体の特性

品名NW Rose
フェニル FF
NW Rose
フェニル FF LS
NW Rose
フェニル FF HS
NW Rose
フェニル HP
支持基材高度に架橋されたアガロースビーズ
粒子径(μm)45-165
リガンドブチルフェニル(低置換)フェニル(高置換)フェニル
交換機-(CH2)3SO3-CH2N+(CH3)3-CH2COO-(CH2)2N(CH3)2
動的結合容量
(mg/mL)
~115 (Lys) / ~115 (IgG) / ~115 (Lys)~80 / ~140 /~80 (BSA)~105 (Lys)~ 80 (BSA)
作業圧力30 μm 粒子径は<1 MPa,;65 μm, 80 μm 粒子径は <0.5 MPa
pH 安定性2-12 (稼働時), 1-14 (CIP)
作業温度4-30℃

4、サイズ排除クロマトグラフィー媒体(SEC)


5、マルチモードクロマトグラフィー媒体

5-1マルチモード—イオン交換+疎水性(IEX+HIC

*リガンドは説明目的のためのものであり、実際の構造ではありません

モノクローナル抗体(mAb)の中間精製および仕上げ精製に利用可能。
製品:NW Rose Plus HAM/NW Rose Plus HAM HP
●~90μm/50μm
●–/45-85mg/ml,mAb
✓HCP、DNA、二量体などの効率的な除去。
✓広いpHと導電率の操作条件。
✓従来のアニオン交換クロマトグラフィー(AEX)とは異なる選択性。

モノクローナル抗体(mAb)やその他の高分子の仕上げ精製に利用可能。
製品:NW Rose Plus HCM /NW Rose Plus HCM HP
●~90μm/50μm
●45mg/ml, mAb/60-90mg/ml,mAb
✓高い導電率での高い動的結合容量が生産性を向上させます。
✓効率的な仕上げ精製のための高い分離能。
✓より小さい溶出体積。

5-2マルチモード—サイズ排除+イオン交換+疎水性(SEC+IEX+HIC

ウイルス、プラスミド、およびその他の高分子の精製用に設計されています。

NW Rose Viral L 保持分子量 700 kDa
NW Rose Viral M保持分子量 400 kDa

✓高い装填容量、SEC媒体の最大100倍
✓高流速に対応する大きな細孔サイズ
✓フロースルーモードでの短い処理時間

5-3サイズ排除+イオン交換+疎水性(SEC+IEX+HIC)

 セラミックハイドロキシアパタイト(CHT)は、球状の外観と超大きな細孔サイズを持つ多機能型クロマトグラフィー媒体の一種です。従来の媒体とは異なり、CHTは金属親和性とイオン交換の両方の能力を持ち、特別な分離能力を有し、独自で効果的な精製ソリューションを提供します。
 CHT媒体は、抗体、組換えタンパク質、ウイルス粒子、DNA、ワクチン、アイソザイムなどの精製において、補足から仕上げ精製まで使用可能です。

6、正相 シリカクロマトグラフィー媒体

6-1正相シリカ—UniSil シリーズ クロマトグラフィー媒体

製品技術仕様

製品結合相粒子サイズ(μm)細孔サイズ(Å)応用
UniSil1.7/2.0/2.7/3 (分析) 5、5L 8/10(調製) 20/30/50100/120/200/300/500 1000/1500有機小分子、抗生物質など
UniSil Diolジオール1.7/2.0/2.7/3/5/5L 8/10/20/30/50100/120極性化合物
UniSil NH2NH21.7/2.0/2.7/3/5/5L 8/10/20/30/50100/120糖類、水溶性ビタミンなど
UniSil CNCN1.7/3/5/5L/8/10100/120極性ハーブ製品

pH 安定性: 2-8

売れ筋製品:
UniSil 10-100、UniSil 10-120、 UniSil 10-80、 UniSil 8-100

7、逆相クロマトグラフィー媒体

7-1逆相シリカ—UniSilシリーズクロマトグラフィー媒体

逆相  結合相

80%   C18
10%   C8
5%   C4
3%   フェニル
2%   その他

●利点

✓先進的な結合技術とエンドキャッピング
✓多くの種類の結合相がある
✓ハイブリッドシリーズは優れた耐アルカリ性を持つ
✓高い機械的強度

逆相シリカ—UniSil シリーズの特性

製品結合相粒子サイズ(μm)細孔サイズ(Å)pH 安定性
UniSil C18C188/10 3/5/15/20/30/50100/120/200/3002-8
UniSil C18 AQC183/5/101202-8
UniSil C18 Polarアミド基がC18に 組み込まれている3/5/101202-8
UniHybrid C18C188/10/15/20/30/501201-11
UniHybrid C8C88/10/15/20/30/50120
UniSil C4C43/5/8/10120/3002-8
UniSil C8C88/10 3/5/15/20/30/50100/120/2002-8
UniSil Phフェニルプロピル3/5/101202-8
UniSil PFPペンタフルオロフェニル3/101202-8
UniSil PBBペンタブロモフェニル5/101202-8

売れ筋製品:
UniSil 10-120 C18、 UniSil 10-100 C18、 UniSil 30-120 C18、 UniSil 10-120 C8、UniHybrid 8-120 C8

7-2逆相ポリマー—Uniシリーズクロマトグラフィー媒体

製品技術仕様

製品UniPS シリーズUniPMM シリーズUniPSN シリーズUniPSA シリーズNM シリーズ
基材PS/DVBPMMAPS/DVB/PVPPS/DVBPS/DVB
粒子サイズ(μm)3/5/10/15/20/30/40/5020/4025/30/40/55/603050-150/150-300
細孔サイズ(Å)100/300/500/750/ 1000/2000/4000500300300/500300
pH 安定性1~142~122~131~141~14
稼働温度4~40℃4~40℃4~40℃4~40℃4~40℃
動的結合容量*
mg/ml Gel
18~26 mg(VA)
26~53 mg(IN)
~6 mg(VA)
~38 mg(IN)
20~21 mg(VA)
27~82 mg(IN)
~22 mg(VA)
~45 mg(IN)
17 mg(VA)
9 mg(IN)
*VAはバンコマイシンの略であり、Inはインスリンの略です。

売れ筋製品:
UniPS 10-300、UniPS 30-100 、UniPS 30-300 、UniPS 40-300 、UniPSA 30-300、UniPSN 30-300、Uni-60S、NM 100

7-3逆相シリカ—UniSil HILIC

★最大60%の水性移動相を使用可能
★従来の逆相クロマトグラフィーでは保持が難しい高極性または親水性化合物の分離に適しており、ヘキサンやクロロホルムといった有害な溶媒の使用不要
★分析の感度が向上

製品技術仕様

製品結合相粒子サイズ(μm)細孔サイズ(Å)応用
UniSilSi-OH1.7/2.0/2.7/3/ 5/5L/8 /10/20/30/50100/120有機小分子、抗生物質、脂溶性ビタミンなど
UniSil DiolDiol3/5/10/30120極性化合物
UniSil NH2NH23/5/10/30120糖類、水溶性ビタミン
UniSil HILICイミダゾリン3/5/10/30120オリゴ糖、グリシンなど
UniSil HILIC-2M2-メチル イミダゾリル3/5/10/30120メラミン、ストレプトマイシンなど
UniSi HILIC-Tトリアゾリル3/5/10/30120オリゴ糖、グリシンなど
UniSil Amideアミド3/5/8/10/20/30/50120ステビアなど
売れ筋製品:
UniSil 10-120 Hilic、UniSil 10-120 Hilic-2M

8、UniSil RevoとUniHybrid Eterne

★最適化された細孔構造と厚い細孔壁により、寿命が向上した次世代のUniSil粒子。
★不純物ピークの選択性と分離能の向上。
★インスリンとGLP-1の精製において高収率と高純度を実現。

★精製市場向けに単分散ハイブリッドシリカ粒子を大量に提供する唯一のプロバイダーです。
★シリカ粒子と同じ機械的強度を持ち、pH 13で10倍以上の化学的寿命を持ちます。
★高pHにおいて、UniHybrid Eterneは、低pHおよび中pHでは分離が難しい不純物を分離するための異なる選択性を提供します。

製品技術仕様

製品粒子サイズ(µm)細孔サイズ(Å)平均比表面積(m2/g)細孔容積(ml/g)pH 範囲粒子強度
(最大圧力)
利用可能な相
UniSil Revo101203201.102-9600C18, C8, C4
UniHybrid Eterne101203201.201-13600C18, C8

UniSil RevoおよびUniHybrid Eterneのクロマトグラフィー媒体の特性

(4.6 x 250 mm, 10 µm, C18)

製品疎水性
(ナフタレンの保持時間)
立体選択性
(o-テルフェニルと トリフェニレンのα)
金属試験
(キノンのTf)
pH7.0/メタノール中の アミトリプチリンのTf
UniSil 10-120 C1813.11.621.131.57
UniSil Revo
10-120 C18
13.41.561.081.24
UniHybrid Eterne
10-120 C18
11.01.301.001.02
Kromasil 10-100 C1813.61.771.672.94

★UniHybrid Eterneは、表面のシラノール基が少ないため、結合密度が低く、強塩基に対してより良好なピーク形状を
示します。
★立体選択性は低いですが、依然として高い疎水性を持っています。

UniSil RevoとUniHybrid Eterneによるセマグルチドの二段階精製

 純度不純物
粗サンプル71.242%39.65%
ターゲット>99.5%単一不純物<0.1%

9、Uni シリーズ イオン交換(IEX

Uni:
小さなPMMAビーズ 主にペプチド、ヌクレオチド、およびより小さなタンパク質分子などの小分子化合物の中間精製または仕上げ精製に使用されます。
粒子サイズ: 36μm,55μm
細孔サイズ: 300Å,500Å

Nano:
小さな PS/ビーズ
主にペプチド、ヌクレオチド、インスリンなどの小~中分子のバイオ分子の分離および精製に使用されます。

UniMSP
小さなPMMAビーズ
疎水性イオン交換のマルチモード作用により、高塩濃度に耐性があります。主に抗生物質の仕上げ精製、ペプチドのキャプチャー、中程度の純度の小分子化合物に使用されます。
粒子サイズ: 33μm,52μm
細孔サイズ: 300Å

製品IEX タイプ粒子サイズ (μm)細孔サイズ(Å)最大圧力(MPa)pH 安定性
UniCM-30SWCEX365001.02-12
UniSP-30SSCEX365001.02-12
UniDEAE-30SWAEX365001.02-12
UniQ-30SSAEX365001.02-12
UniCM-50XSWCEX553000.82-12
UniSP-50XSSCEX553000.82-12
UniDEAE-50XSWAEX553000.82-12
UniQ-50XSSAEX553000.82-12
UniMSP-30XSWCEX333001.02-12
UniMSP-50XSSCEX523000.82-12
売れ筋製品:
UniDEAE-30S、UniQ-30S、UniSP-50XS、UniQ-50XS

三、高分子用クロマトグラフィー媒体選択ガイド


1,高分子タグタンパク質向け

IMACアフィニティ:NW Rose Ni FF    Hisタグ 
GSTアフィニティ:NW Rose GST 4FF   GSTタグ


2,高分子抗体向け

親和: NMab Pro/UniMab 50HC
AEX: UniGel-65Q HC/NanoGel-50Q HC   mAb
CEX: NanoGel-50SP HP

親和:NMab Pro/UniMab 50HC
MM:NM90アガロースHCM        bsAb
AEX:UniGel-65Q HC/NanoGel-50Q HC


3,高分子遺伝子向け

SEC:NW Rose 6FF
AEX:NanoQ-30L           Plasmid(プラスミド)
Plasmid親和:NW Rose Plasmid

mRNA親和:NanoGel dT20   
AEX:UniGel-65Q HC/NanoGel-50Q HC  mRNA

MM:NW Rose Viral M/L         ADV

MM:NW Rose Viral M/L                    LV

AAV 親和:AAV (in R&D)                     
AEX:UniGel-65Q HC/NanoGel-50Q HC  AAV


4、高分子ワクチン向け

SEC:NW Rose 4FF/6FF
AEX:NW Rose Q FF/UniGel-80Q     VLP
AEX:UniGel-80Q/NW Rose Q FF

AEX:AAV UniGel-80Q/NW Rose Q FF   
HIC:UniHR Phenyl/Butyl        Bacteria(細菌)

IEX:NanoGel-50SP HP/NanoGel-50Q   DNA/RNA

ホウ酸親和:UniPB-80L
MM:NM90Agarose HCM       Polysaccharide(多糖)


5、組換えタンパク質向け

AEX:UniGel-65Q HC/NanoGel-50Q HC
MM:NM90Agarose HAM/HCM     rHSA
HIC:UniHR Phenyl/Butyl
ホウ酸親和:UniPB-80L

AEX:UniGel-80Q/UniGel-65Q HC
SEC:NW Super 75          rhG-CSF

AEX:UniGel-65Q HC/UniGel-80Q/UniGel-80DEAE
RPC:UniSil 30-300 C4         rhEPO
SEC:NW Super 150

AEX:UniGel-80DEAE
RPC:UniSil 10-120 C4          GH  
SEC:NW Super 100


6、血漿タンパク質向け

AEX:UniGel-65Q HC/NanoGel-50Q HC
親和:UniMab anti-A/UniMab anti-B    IVIG  

IEX:UniGel-80Q/niGel-80SP
MM:NM90Agarose HCM      Albumin(アルブミン)

AEX:UniGel-80DEAE/NMGel-200DEAE  PCC
Heparin 親和:UniGel-65Heparin/NM90Agarose Heparin  

AEX:UniGel-80DEAE          ATIII
ヘパリン親和:UniGel-65Heparin/NM90Agarose Heparin


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