製品紹介
NW Rose Ni FF アガロースクロマトグラフィー媒体は、金属イオンを予め固定したキレートクロマトグラフィー媒体です。金属キレートクロマトグラフィー媒体（Immobilized-metal affinity chromatography, IMAC）は、生体分子の分離と精製に広く使用されるクロマトグラフィー媒体です。高架橋球状アガロースを原料にし、NTAリガンドと結合した後、Niイオンを固定したNW Rose Ni FFクロマトグラフィー媒体は、親水性、多孔性、高流速、低金属イオン脱離性を特徴とし、ペプチドやタンパク質などの生体分子の分離と精製にも使用できます。特にhisタグを持つ標識タンパク質の精製によく使用されます。NW Rose Ni FFの分離・精製の原理は、金属キレートクロマトグラフィー（IMAC）の原理に基づいています。IMACは、タンパク質表面の電子供与基（例：システイン（Cys）、ヒスチジン（His）、トリプトファン（Trp）など）が金属イオン（通常はZn²⁺、Cu²⁺、Ni²⁺、Co²⁺など）と相互作用し、特定の錯体を形成することで分離と精製を行います。NW Rose Ni FFアガロースクロマトグラフィー媒体の特徴は以下の通りです。
1）Hisタグ付きタンパク質の迅速かつ容易な分離・精製が可能で、タンパク質研究における迅速かつ効率的な精製に適しています。
2）高動的結合容量、低金属イオン脱離性、タンパク質サンプル中の金属イオンの残留を減少させます。
3）化学的安定性が高く、幅広い用途に適しており、低濃度の還元剤や他の添加剤と併用可能です。このシリーズの金属キレートクロマトグラフィー媒体には、NW Rose IMAC FF、NW Rose Chelating FFなど、さまざまな製品が用意されています。
図1. NiイオンをキレートしたNTAリガンド付きアガロースクロマトグラフィー媒体
表1. NW Rose Ni FF 技術仕様
| 製品型式 | NW Rose Ni FF |
| 分離原理 | 金属キレート親和 |
| 基材 | 高流速アガロース微粒子 |
| 粒径 | 45-165 μm |
| リガンド | NTA |
| 動的結合容量 | ~40 mg·mL⁻¹ |
| イオン 容量 | 15μmol·mL⁻¹(Ni²⁺) |
| 最大耐圧 | 0.3 MPa |
| CIPインプレース 洗浄 | 0.5M NaOH（CIP時にNi²⁺を除去する必要あり） |
| 推奨流速 | 150cm/h、50/30クロマトグラフィーカラム（カラム高10cm） |
| 最大流速 | 600cm/h、16/20クロマトグラフィーカラム（カラム高10cm） |
| pH安定性 | 3-12（操作中）、2-14（CIP時、Ni²⁺除去が必要） |
| 化学的安定性 | 一般的な水相溶液、0.1M HCl、0.1M NaOH、2%SDS、30%イソプロパノール、6M塩酸グアニジン、8 M尿素、70%エタノール（Ni²⁺除去条件下） |
| 使用温度 | 4-30℃ |
| 保存条件 | 20%エタノール、4-30℃ |
クロマトグラフィーの応用
異なる応用分野
1．Hisタグ付きタンパク質の精製
NW Rose Ni FFの一般的な精製手順に従って操作します。
- 天然タンパク質の精製
天然タンパク質には、システイン（Cys）、トリプトファン（Trp）、ヒスチジン（His）などのアミノ酸が含まれており、NW Rose Ni FFを使用して分離・精製することができます。既知の3D構造を持つタンパク質に関しては、タンパク質データベースから表面アミノ酸残基の数と配列に関するデータを取得できます。プロテオミクスの発展に伴い、既知の一次構造を持つタンパク質の数が増加し、3D構造がより明確になることで、既知の初級アミノ酸配列に基づく構造モデリングがますます有用かつ精度の高いものとなるでしょう。
バイオ医薬品分野でも、NW Rose Ni FFを使用して製造・製備が可能な製品が数多く存在します。例えば、インターフェロン、ワクチン、抗体、バイオケミカル酵素製品などです。
精製分離のプロセスは、本説明書に記載されているNW Rose Ni FFの条件を最適化し、生産のための精製プロセスを探求することにより行うことができます。
NW Rose Ni FF分離精製に影響を与えない添加剤
| 添加剤 | 一般的な濃度 | |
| 緩衝塩 | リン酸 ナトリウム | 50mM,pH7.4 |
| Tris-HCl | 100mM,pH7.4 | |
| Tris-アセテート | 100mM,pH7.4 | |
| MOPS | 100mM,pH7.4 | |
| HEPES | 100mM,pH7.4 | |
| 非イオン性界面 活性剤 | TritonX-100 | 2% |
| Tween-20 | 2% | |
| 尿素 | 8M | |
| 塩酸グアニジン | 6M | |
| グリセロール | 50% | |
| イソプロパノール | 30% | |
| エタノール | 70% | |
| プロテアーゼ 阻害剤 | PMSF | 1mM |
| ペプシン阻害剤 | 1µM | |
NW Rose Ni FFの分離精製に影響を与える添加剤
| 添加剤 | 最大添加濃度 |
| 2-メルカプト エタノール | 5mM |
| 還元剤 | DTT, DTE 1mM |
| EDTA | 1mM |
| キレート剤 | EGTA 1mM |
| ヒスチジン | イミダゾールに代わる洗脱に使用 |
| クエン酸塩 | 10mM |
NW Rose Ni FF親和性クロマトグラフィー媒体製品仕様書
| 品名 | 包装 | 品番 |
| NW Rose Ni FF | 25 mL | 60042-531800-2025 |
| 100 mL | 60042-531800-2100 | |
| 500 mL | 60042-531800-2500 | |
| 1 L | 60042-531800-1001 | |
| 5 L | 60042-531800-1005 | |
| 10 L | 60042-531800-1010 |
注: 7.7 mm × 22 mm、16 mm × 25 mm、7.7 mm × 100 mm の層析カラムを提供可能です。その他の仕様やカスタマイズについては、お問い合わせください。
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